Total RNA
计算机术语
Total RNA:总RNA,从组织中提取纯化所得的RNA,包含了细胞中的全部RNA,用来区别仅包含mRNA的RNA纯化。
TRIzol法提取Total RNA
准备以下灭菌材料:
1xPBS、TRIzol、1.5mlEP管、氯仿、异丙醇、75%乙醇(DEPC处理)、DEPC处理过的水、1xTE、RNase-free枪头。
1.用枪吸取细胞培养液,后用1xPBS洗一次。
2.加入1ml TRIzol,用枪反复吹吸至溶液不再粘稠,将溶液转移至1.5mlEP管中。
3.常温(15℃~30℃)静置5min,让核蛋白复合体充分裂解。
4.加入270ul氯仿,剧烈振荡15s,常温(15℃~30℃)静置15min。
5.离心4℃,12000rpm,15min。
6.小心吸取上层水相400ul~500ul至一新的离心管中(过程中不要吸到或用枪头碰到位于水相和有机相间的蛋白沉淀),加入670ul异丙醇,常温(15℃~30℃)静置10min。
7.离心4℃,12000rpm,10min。
8.弃上清,用800ul 75%乙醇洗沉淀,混匀后离心,4℃,7500rpm,5min。
9.用枪头小心吸尽上清,静置5min~10min至残余乙醇挥发尽。(不可完全干燥RNA,因这样将显著降低其溶解度。)
10.加入30ul~50ul DEPC处理过的水(RNase-free water),用手指轻弹使其溶解。
11.取2ul RNA样品,溶解在98ul 1xTE中,测浓度(1xTE做空白对照,A260/280=2.0)。确保其浓度达到1.0ug/ul~1.4ug/ul。后取RNA样品,跑1%琼脂糖凝胶,检测Total RNA提取情况。
12.提取出来的Total RNA先进行分装,后保存在-80℃冰箱待用。
参考资料
最新修订时间:2023-07-15 02:56
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